近日，我所质检中心在国际期刊“International Journal of Biological Macromolecules”（中科院1区Top期刊）发表题为“Integrating CRISPR-Cas12a and Rolling Circle-Amplified G-Quadruplex for Naked-Eye Fluorescent “Off-On” Detection of Citrus Alternaria”的研究论文。我所硕士研究生马澜芮为该论文的第一作者，何悦教授和王成秋副研究员为该论文的共同通讯作者。本研究得到现代农业（柑桔）产业技术体系项目和重庆市自然科学基金项目的资助。

链格孢菌是一种重要的真菌病害，它侵染柑桔的叶片、茎干和果实，引起柑桔褐斑病、黑腐病等病害，导致柑桔产业严重的损失。此外，链格孢属真菌可产生70多种有毒代谢产物，统称为链格孢霉毒素。研究表明，链格孢霉毒素具有致癌致畸毒性、细胞毒性、基因毒性以及急性毒性。因此，对链格孢菌进行灵敏、准确、快速的检测不仅有助于柑橘褐斑病的早期预警和防控，更能够有效保障生产安全和生活健康。

图1 （A）链格孢菌基因组DNA检测实验示意图；（B）人工合成的链格孢菌基因组DNA的检测结果图

近期，作为新一代基因编辑技术的CRISPR-Cas12a在核酸诊断领域展现出了巨大的应用前景。该研究将CRISPR-Cas12a系统与RCA信号扩增技术相结合，建立了一种荧光检测法用于柑桔中链格孢菌基因组DNA的可视化检测（图1A）。在优化条件下，该方法对人工合成的链格孢菌基因组DNA的检出限为22 pM，肉眼可视化的检出限为40 pM（图1B）。该方法特异性好，对田间采集的柑桔叶片和果实样品进行检测时，获得了较好的检测结果（图2）。该方法无需分离洗涤，操作简单，有望用于链格孢菌的现场检测分析。

图2（A）实际样品检测流程图；（B）方法特异性分析结果图；（C）田间采集的柑桔叶片和果实样品检测结果图

论文链接：https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0141813024007864?via%3Dihub=